富馬酸單甲酯（Monomethyl Fumarate，MMF，分子式C5H6O4的分子量測定需依托高精度的質(zhì)譜技術(shù)，而純度分析則需結(jié)合色譜、滴定、熔點測定等多種方法，實現(xiàn)主成分含量、雜質(zhì)限度的全面評估，其結(jié)果直接決定該化合物在醫(yī)藥、食品防腐等領(lǐng)域的應(yīng)用可行性。

一、分子量測定方法

富馬酸單甲酯的理論分子量可通過分子式計算：M=(12.01×5)+(1.008×6)+(16.00×4)= 130.10g/mol。實驗測定需采用質(zhì)譜技術(shù)，以驗證理論值并排除分子結(jié)構(gòu)誤判的可能，核心方法如下：

1. 電噴霧電離質(zhì)譜（ESI-MS）

這是測定有機小分子分子量的常用方法，適用于極性較強的富馬酸單甲酯。

樣品前處理：將少量富馬酸單甲酯樣品溶解于甲醇-水（體積比1:1）混合溶劑中，配制成濃度為10^-5~10^-6mol/L}的澄清溶液，避免濃度過高導(dǎo)致離子抑制。

測定條件：采用正離子電離模式，毛細管電壓設(shè)置為3.0~3.5kV，離子源溫度100~120℃，干燥氣（氮氣）流速8~10L/min。

結(jié)果判定：在質(zhì)譜圖中，可觀測到準分子離子峰[M + H]⁺，其質(zhì)荷比（m/z）理論值為131.04；若使用負離子模式，則可觀測到[M - H]^-峰，m/z理論值為129.02。通過該峰的質(zhì)荷比計算，可精準得到樣品的實驗分子量，與理論值的偏差需小于0.1%。

2. 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）

適用于揮發(fā)性較強的富馬酸單甲酯樣品，兼具分離與分子量測定功能，尤其適合含揮發(fā)性雜質(zhì)的樣品。

樣品前處理：將樣品溶解于丙酮或二氯甲烷中，制成低濃度溶液，避免高沸點雜質(zhì)污染色譜柱。

測定條件：采用非極性毛細管色譜柱（如DB-5MS），柱溫程序為：初始溫度60℃保持2min，以10℃升溫至180℃保持5min；離子源為電子轟擊源（EI），電離能量70eV。

結(jié)果判定：在總離子流圖中定位富馬酸單甲酯的色譜峰，提取其質(zhì)譜圖，可觀測到分子離子峰M⁺（m/z=130），同時伴隨特征碎片離子峰（如m/z=115、97、71 等），通過分子離子峰的質(zhì)荷比確定分子量。

二、純度分析方法

富馬酸單甲酯的純度分析需涵蓋主成分含量測定與雜質(zhì)（如富馬酸、富馬酸二甲酯、甲醇、水分等）限度檢測，核心方法如下：

1. 高效液相色譜法（HPLC）：主成分含量與有關(guān)物質(zhì)測定

這是純度分析的首選方法，可同時實現(xiàn)主成分定量與雜質(zhì)定性定量。

色譜條件：采用反相色譜柱（如C18柱，250mm×4.6mm，5μm）；流動相為甲醇-0.05%磷酸水溶液（體積比30:70），流速1.0mL/min；檢測波長210nm（基于樣品前處理：精密稱取樣品約50mg，置于100mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻后過0.45μm微孔濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另精密稱取富馬酸單甲酯對照品適量，同法制備對照品溶液。

有關(guān)物質(zhì)檢測：取供試品溶液稀釋100倍作為自身對照溶液，進樣分析。按峰面積歸一化法計算雜質(zhì)含量，單個雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液主峰面積的0.5倍（0.5%），總雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液主峰面積的1.0倍（1.0%）。

2. 酸堿滴定法：主成分含量的經(jīng)典驗證

基于富馬酸單甲酯分子中的羧基（-COOH）具有酸性，可采用堿滴定法測定含量，方法簡便、準確度高。

滴定條件：精密稱取樣品約0.2g，置于錐形瓶中，加中性乙醇（對酚酞指示液顯中性）20mL溶解，加酚酞指示液2滴，用0.1mol/L 氫氧化鈉標準滴定液滴定至溶液顯粉紅色，且30秒內(nèi)不褪色。

含量計算：富馬酸單甲酯與氫氧化鈉的反應(yīng)摩爾比為1:1，含量計算公式為：

純度}(%) = [V×C×0.1301/m]×100%

其中，V為氫氧化鈉標準液的消耗體積（mL），C為氫氧化鈉標準液的濃度（mol/L），0.1301為富馬酸單甲酯的毫摩爾質(zhì)量（g/mmol），m為樣品稱樣量（g）。

3. 雜質(zhì)專項檢測

（1）游離酸（富馬酸）檢測

取樣品約1.0g，加無水乙醇20mL溶解，加溴麝香草酚藍指示液，用0.01mol/L 氫氧化鈉標準液滴定至溶液顯藍色。按消耗的堿液體積計算游離酸含量，不得過0.5%。

（2）殘留溶劑（甲醇）檢測

采用頂空進樣氣相色譜法，以聚乙二醇（PEG-20M）為固定相的毛細管柱，柱溫5℃，檢測器為火焰離子化檢測器（FID），以水為溶劑制備供試品溶液，外標法計算甲醇殘留量，需符合相關(guān)藥典殘留溶劑限度要求（通常不得過0.3%）。

（3）水分測定

采用卡爾·費休容量法或庫侖法，稱取適量樣品，溶于無水甲醇中，測定水分含量，不得過0.5%，避免水分影響結(jié)晶性與穩(wěn)定性。

4. 熔點測定：純度的輔助判定

純品富馬酸單甲酯的熔點為144~145℃，若樣品中含雜質(zhì)，熔點會降低且熔程變長（通常熔程大于2℃提示純度不足）。測定時需采用毛細管法，控制升溫速率為1/min，平行測定3次，取平均值。

三、方法學(xué)驗證要求

為確保測定結(jié)果的準確性與可靠性，需對上述方法進行方法學(xué)驗證，核心驗證指標包括：

專屬性：色譜法中，富馬酸單甲酯主峰需與雜質(zhì)峰、溶劑峰完全分離，分離度大于1.5；滴定法中，空白溶劑無干擾。

線性與范圍：HPLC法的線性范圍需覆蓋50% ~150%濃度區(qū)間，相關(guān)系數(shù)r≥0.999。

精密度：重復(fù)性試驗的相對標準偏差（RSD）不得過1.0%，中間精密度RSD不得過 2.0%。

準確度：加樣回收率試驗的回收率需在98.0%~102.0%范圍內(nèi)，RSD不得過 1.5%。

富馬酸單甲酯的分子量測定以ESI-MS或GC-MS為核心，通過準分子離子峰或分子離子峰精準驗證理論分子量；純度分析則需結(jié)合HPLC法（主成分與雜質(zhì)）、酸堿滴定法（含量驗證）及專項雜質(zhì)檢測，實現(xiàn)全面質(zhì)量控制。方法學(xué)驗證是確保檢測結(jié)果可靠的關(guān)鍵，最終需滿足醫(yī)藥或食品領(lǐng)域的純度標準要求。

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